背景：间充质干细胞通过递送外泌体对放射性肺损伤具有巨大的治疗潜力，而年龄是影响间充质干细胞功能和生物疗效的主要因素之一。 目的：探究不同鼠龄骨髓间充质干细胞来源外泌体对小鼠放射性肺损伤的保护作用。 方法：采用全骨髓贴壁培养法获得青年小鼠骨髓间充质干细胞和老年小鼠骨髓间充质干细胞，从第3代骨髓间充质干细胞上清液中分离出外泌体。随机取10只2月龄C57BL/6J小鼠进行假照射作为对照组，剩余30只2月龄C57BL/6J小鼠建立放射性肺损伤模型，随机分为3组，分别经尾静脉注射青年小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体、老年小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体和PBS，观察各组小鼠存活率，在照射后第1，12周检测肺功能、肺组织炎症和纤维化情况。 结果与结论：①青年小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体的颗粒物和蛋白质浓度高于老年小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体；②与对照组相比，PBS组小鼠存活率低，照射后第1周肺组织炎症明显，白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平及mRNA表达升高；照射后第12周肺组织内胶原沉积，E-钙黏蛋白mRNA水平降低，而α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1和β-连环蛋白mRNA表达升高；③与PBS组相比，外泌体组小鼠存活率显著提高，照射后第1周促炎因子水平及mRNA表达降低，照射后第12周E-钙黏蛋白mRNA表达升高，α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1和β-连环蛋白mRNA表达降低；④上述所有指标中，青年小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体的疗效均优于老年小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体；⑤结果表明，青年小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体含有更多颗粒物和蛋白质，对小鼠放射性肺损伤早期炎症和晚期纤维化的缓解效果优于老年小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体。

背景：人体增龄衰老可能是由于体内各种干细胞的衰老和耗竭。骨髓间充质干细胞具有重要的生理功能并对多种疾病展现出一定的疗效，研究骨髓间充质干细胞的衰老及机制具有重要意义。 目的：探讨人骨髓间充质干细胞是否伴随供者年龄的增加而呈现衰老表型，并进一步检测内源性反转录病毒是否驱动骨髓间充质干细胞的增龄衰老，为干细胞衰老机制研究提供新参考。 方法：采用流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色、qPCR、免疫印迹法及EdU荧光成像对不同年龄段的骨髓间充质干细胞进行衰老表征研究。收集不同年龄段供者的骨髓间充质干细胞及细胞培养上清，通过qPCR法检测人内源性反转录病毒的含量，进一步采用高灵敏的液滴式数字PCR检测细胞培养上清中内源性反转录病毒颗粒的表达，并用ELISA检测不同年龄段骨髓血浆样本中的内源性反转录病毒含量。 结果与结论：骨髓间充质干细胞具有明显的增龄衰老，包括显著的形态学改变、β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例升高、衰老标志物P16和P21蛋白表达升高，LMNB1蛋白表达下降，细胞增殖能力减弱。不同年龄段骨髓间充质干细胞中的内源性反转录病毒含量无显著性差异，培养上清中几乎不存在内源性反转录病毒颗粒，不同年龄段骨髓血浆样本中内源性反转录病毒无显著性差异。结果表明，人骨髓间充质干细胞具有正常生理性增龄衰老，但不是通过内源性反转录病毒的异常激活介导的，可能具有更加复杂的驱动机制。

背景：临床上主要应用自体骨、异体骨或人工骨促进骨缺损修复，然而不愈合率仍维持较高水平状态，关键是忽视了骨膜在骨愈合过程中的重要性。项目组前期通过构建负载血管内皮生长因子的静电纺丝膜在骨缺损处高度模拟天然骨膜的膜内成骨过程，一定程度上促进了骨再生。但是，损伤局部常面临巨噬细胞介导的剧烈炎症反应和种子细胞匮乏的窘境，导致递送生物因子面临失活或弥散的风险。因此，尚需进一步优化和协调仿生骨膜的免疫调控和成血管功能，促进骨修复。 目的：探讨干细胞工程化仿生骨膜的理化性质以及调控炎症微环境促进骨修复的作用。 方法：将左旋聚乳酸基微溶胶静电纺丝、Ⅰ型胶原蛋白自组装与凝胶干细胞移植技术结合，构建核层负载血管内皮生长因子、壳层递送骨髓间充质干细胞调控骨缺损免疫微环境的仿生骨膜(M@C-B)。通过扫描电镜、透射电镜、傅里叶红外光谱仪等检测骨膜的理化特性；通过仿生骨膜与巨噬细胞、骨髓间充质干细胞和人脐静脉内皮细胞建立共培养体系，探讨其免疫调控、体外成骨和成血管能力；最后，在大鼠股骨髁缺损模型中进一步验证干细胞工程化仿生骨膜的成骨性能。 结果与结论：①透射电镜观察显示微溶胶静电纺丝(MS)人工骨膜形成明显的核壳结构，扫描电镜观察显示负载血管内皮生长因子的微溶胶表面自组装Ⅰ型胶原蛋白(M@C)人工骨膜表面出现明显“蜘蛛网状”纤维结构沉积，红外光谱检测进一步表明Ⅰ型胶原蛋白自组装成功；释放实验证明M@C人工骨膜较MS人工骨膜缓解了突释现象的发生，维持内部血管内皮生长因子活性和长效释放；②活死荧光染色、CCK-8实验显示，骨髓间充质干细胞在MS人工骨膜、单纯定向左旋聚乳酸表面自组装Ⅰ型胶原蛋白(PLLA@C)人工骨膜以及M@C-B人工骨膜上良好增殖并存活，其中M@C-B组活细胞数目最多且增殖速率最高；③碱性磷酸酶染色、茜素红染色、骨桥蛋白免疫荧光染色显示，PLLA@C组和M@C-B组人工骨膜可显著促进骨髓间充质干细胞成骨分化；成血管实验显示，MS组、M@C-B组血管长度更长，血管样染色结构呈网状形态，交叉节点更多，其中M@C-B组更为明显；④免疫荧光和细胞流式显示，M@C-B组人工骨膜能显著抑制促炎巨噬细胞表型，促进巨噬细胞向抗炎M2表型方向极化；⑤体内研究进一步表明M@C-B组大鼠骨密度、骨小梁厚度、相对骨体积和骨小梁间隙皆优于其他组；⑥结果提示：构建的骨髓间充质干细胞工程化人工骨膜通过Ⅰ型胶原蛋白/骨髓间充质干细胞外相快速调控骨缺损免疫微环境与内相微溶胶静电纺丝核壳结构持续释放血管内皮生长因子，协同双向促进骨愈合。

背景：纳米细胞囊泡具有再上皮化、抗氧化、抗炎以及调节细胞外基质重塑等功能，凋亡小体具有免疫调节作用，因此二者结合所形成的纳米融合囊泡可协同促进糖尿病皮肤创面愈合。 目的：探讨纳米融合囊泡对糖尿病小鼠皮肤创面的愈合作用。 方法：①材料制备及表征：分离提取C57BL/6J乳鼠原代骨髓间充质干细胞纳米囊泡和C57BL/6J小鼠骨髓来源中性粒细胞凋亡小体，将二者结合采用微型挤出机制备纳米融合囊泡。②体外实验：采用MTT检测不同浓度纳米融合囊泡对NIH-3T3细胞和人脐静脉内皮细胞的增殖作用；采用活性氧荧光探针检测纳米融合囊泡对过氧化氢干预的NIH-3T3细胞的抗氧化作用；采用实时定量RT-qPCR法检测纳米融合囊泡对脂多糖引发的RAW 264.7巨噬细胞炎症反应的抑制效果。③体内实验：36只雄性C57BL/6J小鼠构建糖尿病小鼠模型，造模成功后在糖尿病小鼠脊柱两侧使用打孔机分别制备直径6 mm的2个圆形创面，采用随机数字表法分为3组，对照组创缘皮下注射0.1 mL磷酸盐缓冲液，纳米囊泡组注射0.1 mL 25 μg/mL纳米囊泡，纳米融合囊泡组注射0.1 mL 25 μg/mL纳米融合囊泡，连续治疗3 d，观察创面愈合情况与组织形态学变化。 结果与结论：①体外实验：纳米融合囊泡在质量浓度为0-100 μg/mL时均无毒性作用，且可促进NIH-3T3细胞和人脐静脉内皮细胞的增殖，其中25 μg/mL纳米融合囊泡促进NIH-3T3细胞增殖的效果最明显，而人脐静脉内皮细胞的存活率则随着纳米融合囊泡质量浓度的增加不断增强。纳米融合囊泡具有良好的抗氧化效果，与过氧化氢组相比，纳米囊泡组和纳米融合囊泡组的活性氧荧光信号依次减弱。此外，纳米融合囊泡还具有抗炎能力，降低了脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应。②体内实验：苏木精-伊红染色与Masson染色显示，与对照组相比，术后第6天纳米囊泡组和纳米融合囊泡组创面均表达出丰富的胶原纤维以及肉芽组织，其中以纳米融合囊泡组最多；术后第12天，纳米融合囊泡组创面显著缩小，且愈合速度显著快于其他组，促创面愈合效果最为显著。结果表明，纳米融合囊泡能够展现出促细胞增殖、抗氧化和抗炎特性，从而在促进糖尿病小鼠皮肤创面愈合过程中发挥积极作用。

背景：目前发现miR-196b-5p在细胞增殖、迁移及抑制瘢痕增生中发挥作用，但在创面愈合过程中是否发挥作用缺乏相关研究。 目的：探讨脂肪干细胞源性外泌体中miR-196b-5p对烧伤创面愈合的影响。 方法：构建SD大鼠皮肤深Ⅱ度烧伤模型，随机分为4组：空白对照组、外泌体组、agomiR-196b-5p组和外泌体+antagomiR-196b-5p组，每组10只，根据不同分组于创周注射PBS、脂肪干细胞源性外泌体、miR-196b-5p激动剂和miR-196b-5p抑制剂，伤后即刻和伤后7，14，21 d观察创面愈合情况，伤后7 d苏木精-伊红染色观察创面炎症表达，伤后14 d Masson染色观察创面胶原表达及免疫组化染色观察创面CD31表达，伤后7 d Western blot检测创面中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达。 结果与结论：①agomiR-196b-5p组创面愈合较快，空白对照组和外泌体+antagomiR-196b-5p组愈合较慢；②与空白对照组和外泌体+antagomiR-196b-5p组相比，外泌体组和agomiR-196b-5p组创面炎性细胞浸润较少，CD31表达明显增加(P < 0.01)；③与空白对照组和外泌体+antagomiR-196b-5p组相比，外泌体组和agomiR-196b-5p组中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达升高(P < 0.05)。结果表明，脂肪干细胞源性外泌体中miR-196b-5p能促进大鼠烧伤创面愈合。

背景：骨髓间充质干细胞在股骨头坏死等疾病的治疗中发挥重要作用，其治疗效果与细胞质量息息相关，如何为细胞赋能成为如今研究的热点。 目的：探究低氧模拟剂二甲基氧化甘氨酸预处理对人骨髓间充质干细胞线粒体自噬、分化能力的影响。 方法：从患者髂骨的骨髓血中提取骨髓间充质干细胞，体外培养至第3代，用0，10，50，100 μmol/L 二甲基氧化甘氨酸处理24 h，然后更换成骨诱导分化培养基，此为预处理组；而在细胞贴壁后直接用含有0，10，50，100 μmol/L二甲基氧化甘氨酸的成骨诱导培养基培养，此为持续处理组。诱导7 d后进行碱性磷酸酶染色，选出最利于成骨分化的条件为实验组，正常培养的骨髓间充质干细胞为对照组。采用碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性、油红O染色及RT-qPCR评估两组骨髓间充质干细胞的成骨、成脂分化差异；采用MitoSox染色检测线粒体活性氧水平；采用Mito-tracker和Lyso-tracker染色检测线粒体和溶酶体的共定位情况；使用荧光探针JC-1检测线粒体膜电位。 结果与结论：碱性磷酸酶染色显示，对骨髓间充质干细胞成骨最有利的处理方式为10 μmol/L二甲基氧化甘氨酸预处理24 h。与对照组相比，实验组骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶染色表达增强，碱性磷酸酶活性和成骨相关基因表达升高，油红O染色显示脂滴生成减少以及成脂相关基因表达下降，线粒体活性氧生成减少，线粒体和溶酶体的共定位增多，线粒体膜电位升高。结果表明，10 μmol/L二甲基氧化甘氨酸预处理可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化，抑制成脂分化，并增强线粒体自噬。

背景：肌肉减少症是一种增龄相关的骨骼肌肉量减少、肌肉力量下降和/或躯体功能减退的老年性疾病。目前，针对肌肉减少症的有效治疗手段仍然匮乏，探索新的治疗方法以改善肌肉减少症患者的症状和预后具有重要的临床意义。 目的：探讨犬脂肪来源间充质干细胞及外泌体对地塞米松诱导的小鼠肌肉减少症模型的影响。 方法：从犬脂肪组织中分离并培养脂肪间充质干细胞，通过流式细胞术和成骨、成脂肪、成软骨分化实验进行细胞鉴定及功能评估。随后提取脂肪间充质干细胞外泌体，通过透射电镜、Western blot、库尔特纳米单颗粒检测技术对外泌体进行表征。在体外，使用地塞米松诱导C2C12肌管萎缩模型和C2C12衰老模型，观察犬脂肪来源间充质干细胞及外泌体对肌管生长和肌肉萎缩基因表达的影响。在体内，使用地塞米松诱导构建小鼠肌少症模型，腹腔或静脉注射犬脂肪间充质干细胞治疗，通过小鼠转棒行为学研究、组织病理检查、肌肉萎缩基因检测进行疗效评估。 结果与结论：①分离的犬脂肪间充质干细胞高表达CD73、CD90、CD105，低表达MHC-Ⅱ、CD14、CD19、CD34、CD45，在体外能够成功分化为成骨、成脂和成软骨细胞；②脂肪间充质干细胞外泌体粒径大小、电镜形态、特异性标志物阳性表达符合鉴定标准；③与地塞米松诱导的萎缩C2C12细胞相比，脂肪间充质干细胞及外泌体治疗后均可促进肌管的恢复和生长，抑制肌肉萎缩相关基因MuRF1和Atrogin-1的表达；④与衰老C2C12细胞组比，脂肪间充质干细胞及外泌体可显著促进衰老细胞肌管的恢复和生长；⑤与对照组小鼠相比，地塞米松诱导的肌少症模型小鼠在棒时间显著减少(P < 0.01)，脂肪间充质干细胞腹腔和静脉给药后7 d(P < 0.01，P < 0.01)和10 d(P < 0.01，P < 0.05)均可显著增加在棒时间，给药后14 d，各治疗组小鼠在棒时间均高于模型组，但无显著差异；⑥与对照组相比，地塞米松组胫前肌肌管面积显著减小(P < 0.01)，脂肪间充质干细胞腹腔和静脉给药后可显著增加胫前肌肌管横截面积(P < 0.05，P < 0.01)；⑦与地塞米松组相比，脂肪间充质干细胞腹腔和静脉给药可显著抑制MuRF1和Atrogin-1基因表达(P < 0.01，P < 0.01，P < 0.01，P < 0.01)。结果表明，脂肪来源间充质干细胞及外泌体可通过抑制肌肉萎缩基因表达，促进萎缩肌管细胞恢复和生长，腹腔和静脉注射脂肪来源间充质干细胞均对肌肉减少症小鼠有良好的治疗作用。

背景：间充质干细胞分泌组中含有生物活性物质、细胞因子及生长因子等，三维细胞培养可调控间充质干细胞内含物的分泌，有望提升损伤修复的潜能。 目的：探讨三维培养人脐带间充质干细胞分泌组对小鼠皮肤损伤的修复效果。 方法：用常规二维培养皿和96孔U底细胞培养板培养人脐带间充质干细胞，收集其分泌组分，RT-qPCR检测人脐带间充质干细胞中皮肤损伤修复相关分泌因子基因表达水平，酶联免疫吸附实验检测人脐带间充质干细胞分泌组中皮肤损伤修复相关因子的蛋白表达水平；使用永生化人脐静脉内皮细胞迁移模型检测人脐带间充质干细胞分泌组的血管损伤修复潜能。建立小鼠皮肤损伤模型，经皮下注射人脐带间充质干细胞分泌组，通过伤口愈合率和组织病理学分析验证皮肤损伤的修复效果。 结果与结论：①培养3 d后，二维培养的人脐带间充质干细胞呈成纤维细胞样漩涡状生长，三维培养的人脐带间充质干细胞为均一微球体；②与二维培养相比，三维培养的人脐带间充质干细胞中转化生长因子β、碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达水平显著升高；③与二维培养相比，三维培养的人脐带间充质干细胞分泌组中血管内皮细胞生长因子、白细胞介素10、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子蛋白表达水平显著升高；④与二维培养相比，三维培养的人脐带间充质干细胞分泌组可显著促进永生化人脐静脉内皮细胞的迁移；⑤与未处理对照组和二维培养的人脐带间充质干细胞分泌组相比，三维培养的人脐带间充质干细胞分泌组可显著加快小鼠皮肤伤口愈合速率和伤口皮肤结构重塑。研究结果表明：三维培养可提高人脐带间充质干细胞的旁分泌因子表达，其分泌组可显著促进小鼠皮肤损伤修复。

背景：研究发现人脐血富血小板血浆与人脐血间充质干细胞对薄型子宫内膜有一定治疗效果，但目前针对人脐血单个核细胞对薄型子宫内膜的研究尚未报道，且目前尚缺乏三者比较的相关研究。 目的：探讨人脐血富血小板血浆、单个核细胞及间充质干细胞修复大鼠薄型子宫内膜的效果与机制。 方法：60只雌性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、人脐血富血小板血浆组、人脐血单个核细胞组和人脐血间充质干细胞组，每组12只。假手术组宫角注射0.5 mL生理盐水，5 min后再灌注0.5 mL PBS；模型组、人脐血富血小板血浆组、人脐血单个核细胞组和人脐血间充质干细胞组宫角注射0.5 mL体积分数95%乙醇，5 min后吸出剩余乙醇，经生理盐水冲洗2次后再分别灌注0.5 mL PBS、人脐血富血小板血浆、人脐血单个核细胞悬液(1×107个)和人脐血间充质干细胞悬液(1×107个)，于再灌注后第3个正常动情周期的动情间期收集脏器组织与血清，检测相关指标。 结果与结论：①子宫组织大体观、苏木精-伊红染色和Masson染色结果：假手术组结构完整，内膜厚度适中，血管结构清晰。与假手术组相比，模型组子宫萎缩，结构不完整，内膜厚度、腺体数量明显减少，血管结构紊乱，纤维化增加；与模型组相比，经人脐血衍生物治疗后，子宫大小、结构、内膜厚度均有所恢复(均P < 0.01)，并且纤维化均减轻，其中以人脐血单个核细胞组恢复最为明显。在腺体数量增加方面，以人脐血富血小板血浆组效果最为显著(P < 0.000 1)。②子宫组织免疫组化与免疫荧光结果显示，与假手术组相比，模型组细胞增殖相关指标角蛋白9、波形蛋白，内膜容受性相关指标白血病抑制因子、整合素αγβ3，血小板内皮细胞黏附分子、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子表达均降低(均P < 0.05)。与模型组相比，经人脐血衍生物治疗后以上指标均有显著性升高，人脐血衍生物各组比较：角蛋白9、血管内皮生长因子蛋白：人脐血单个核细胞组>人脐血间充质干细胞组>人脐血富血小板血浆组；波形蛋白、白血病抑制因子蛋白：人脐血间充质干细胞组>人脐血单个核细胞组>人脐血富血小板血浆组；整合素αγβ3蛋白：人脐血富血小板血浆组>人脐血间充质干细胞组>人脐血单个核细胞组；血小板内皮细胞黏附分子蛋白：人脐血富血小板血浆组>人脐血单个核细胞组>人脐血间充质干细胞组；碱性成纤维细胞生长因子蛋白：人脐血单个核细胞组>人脐血富血小板血浆组>人脐血间充质干细胞组。③Western blot检测显示，与假手术组相比，模型组白细胞介素6、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α蛋白表达水平显著升高(均P < 0.001)，经人脐血衍生物治疗后上述指标均降低(均P < 0.05)。④ELISA检测显示，与假手术组相比，模型组抗缪勒氏管激素、雌二醇、孕酮水平降低，促卵泡生成素、促黄体生成素水平增加(除促黄体生成素外，均P < 0.05)。经人脐血衍生物治疗后，性激素和抗缪勒氏管激素水平有一定程度恢复。⑤生育力实验显示，与假手术组相比，模型组受孕时间有所增加，产仔数明显降低(均P < 0.05)。经人脐血衍生物治疗后，3组产仔数均有所增加(P < 0.05)，组间比较尚未发现明显差异。此研究初步表明人脐血单个核细胞对薄型子宫内膜有一定治疗效果，且人脐血富血小板血浆、人脐血单个核细胞和人脐血间充质干细胞分别在改善薄型子宫内膜再生功能、内膜容受性、血管生成、炎症调控及妊娠结局方面具有不同的优势与差异。

背景：研究证实大麻素受体Ⅰ能够促进神经干细胞和间充质干细胞的增殖及神经向分化，也可以调节人根尖牙乳头干细胞的增殖和矿化能力。然而，关于大麻素受体Ⅰ过表达对人根尖牙乳头干细胞神经分化的影响，目前国内外相关研究较少。 目的：探讨大麻素受体Ⅰ在体外环境下对人根尖牙乳头干细胞神经向分化能力的影响。 方法：收集因正畸治疗需要拔除的根尖尚未完全发育成熟的健康第三磨牙，采用组织块法和酶消化法进行原代人根尖牙乳头干细胞的分离培养。通过慢病毒介导的转染技术，将大麻素受体Ⅰ基因引入人根尖牙乳头干细胞中，设置空白对照组、阴性对照组和过表达大麻素受体Ⅰ组，通过Western blot验证过表达大麻素受体Ⅰ慢病毒转染效果；设置对照组、阴性对照组、过表达大麻素受体Ⅰ组和过表达大麻素受体Ⅰ+AM251(大麻素受体Ⅰ拮抗剂)组，分别在成神经诱导第1，5，10天采用CCK-8法检测细胞增殖能力，成神经诱导第10天采用qRT-PCR检测TH、NeuroD-1、NCAM1基因表达水平以及免疫荧光检测Nestin、TUBB3蛋白表达。 结果与结论：①与空白对照组和阴性对照组相比，过表达大麻素受体Ⅰ组大麻素受体Ⅰ蛋白表达量明显升高，差异有显著性意义(P < 0.05)；②与空白对照组和阴性对照组相比，成神经诱导第5，10天时，过表达大麻素受体Ⅰ组人根尖牙乳头干细胞的增殖能力最强(P < 0.05)；③与空白对照组和阴性对照组相比，过表达大麻素受体Ⅰ组人根尖牙乳头干细胞中NeuroD-1、NCAM1、TH mRNA表达量显著增加，Nestin和TUBB3荧光强度显著增强(P < 0.05)；④与过表达大麻素受体Ⅰ组相比，过表达大麻素受体Ⅰ+AM251组人根尖牙乳头干细胞增殖能力显著下降，NeuroD-1、NCAM1、TH mRNA表达量以及Nestin、TUBB3荧光强度显著降低(P < 0.05)。结果表明：过表达大麻素受体Ⅰ能促进人根尖牙乳头干细胞的增殖及神经向分化。